氨甲环酸的检测方法及其药理活性的研究进展

作者:方艳艳时间:2015-12-15 16:46:04  来源:  阅读次数:639次 ]
1  引言
氨甲环酸(Tranexamic Acid,以下简称 TA) ,又名反
-4-(氨甲基)环己甲酸(结构式如图 1 所示) ,止血环酸。其
作用机理主要通过抑制蛋白溶酶及纤维蛋白溶酶原的激活,
包括与纤维蛋白溶酶原形成 1:1 的复合物, 引起纤维蛋白溶
酶原构象改变,或与纤维蛋白溶酶的重链结合,引起其构象
变化,使该酶或酶原失去活性,达到止血的效果;同时研究
还发现,TA 可抑制由紫外线照射导致的色素沉积,从而使皮
肤达到美白的效果。随着社会的进步,TA 的使用范围越来越
广,用量也越来越大,因此建立快速、简便、准确的分析方
法对药物分析、药理研究等具有重要意义。本文综述了 TA
的检测方法,使用仪器包括荧光光谱仪、高效液相色谱仪、
气相色谱仪等,并且探讨了其药理活性,以期创造良好的经
济和社会效益,并为 TA 在医药领域的深入开发提供依据和
思路。
图 1 氨甲环酸的结构式
2  氨甲环酸的检测技术
如图 1 所示,由于 TA 分子本身没有共轭结构,因此无
论在紫外-可见吸收光谱(UV-vis) ,还是在荧光光谱(FL)
上均没有吸收和发射的峰值出现。 基于此, 必须在 TA 分子上,
主要在-NH2 位置添加生色团或荧光团以提高检测的灵敏性。
2.1  高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)是最为常用的分离和检测手段
具有分析速度快,分离效能好,灵敏度高等优点,已为各国
药典所采用。
2.1.1 HPLC-UV 法
Ghada 等[1]将 TA 与生色团异硫氰酸苯酯反应,得到衍
生产物,并通过 UV 分析得到其吸收值为 245 nm。优化 HPLC
的流动相为乙腈/水,比例 65:35(V/V) ,以 10 mM 磷酸二氢
钾/磷酸为缓冲液,以盐酸调整 pH 至 3.6,流速控制 1.5
mL/min。该方法样品处理简单,经一步衍生后无需处理直接
进入 HPLC 系统,同时其洗脱时间和分析时间相对较短,分
别少于 8 min 和 13 min;检测下限 36.1 ng/mL,且其标准
偏差小于 2%,具备良好的精度。
2.1.2 HPLC-FL
2,3-萘二甲醛(NDA)是一类常用的衍生化试剂,可与氨
基化合物迅速反应形成发光化合物。Huertas-Pérez 等[2]
利用该过程将 TA 反应, 利用生成衍生产物稳定且放光明显,
而原料本身发出的荧光可忽略不计的特性,使该检测方法具
有很大的可行性。Huertas-Pérez 等将该方法应用于测量全
血和贫血小板血浆中 TA 的含量,反应后需离心过滤以便进
入 HPLC 系统后更好的分离,而后通过检测其荧光强度来确
定 TA 的浓度。该方法重现性相对较好,RSD <12%(全血样
品) ,线性测试显示其 R2 = 0.9996(贫血小板血浆样品) ,
检测下线为 0.5 μg/mL。并且该方法有望用于 TA 药物定位
激光方法达到治疗鲜红斑痣及其他可能的血管异常病例。
2.1.3 SPME-LC-MS
液相色谱-串联质谱用于测量血液中的药物浓度,可以
提高选择性和灵敏度。 Bojko 等[3]利用该方法测试了血液
中 TA 的浓度。为消除血液中潜在的干扰,使用固相微萃取
法(SPME)对血液进行预处理。测试结果显示,其检测下线为
0.5 μg/mL,定量的下线为 1.5 μg/mL,另外准确度和精密
度分别小于 9%和 11%。实践证明,固相微萃取法有望成为很
好的标准样品制备技术,与液相色谱及质谱联用,可直接用
于检测心脏手术时体外循环的血浆样品。
2.3  薄层色谱法
Tampubolon 等[4]设计了简单而快速的双波长薄层色谱
法测定 TA 的浓度。将提取后的样品溶于乙醇和水的混合溶
液(1:1,V/V) ,而后溶液点样于薄层色谱板上,用正丁醇-
冰醋酸-水(8.0:2.0:2.0,V/V)为展开剂,在波长为 488 nm
处通过检测 TA 的吸光度来测定其浓度。测试结果显示,相
对标准偏差<2%。该方法相比于 HPLC,价格相对低廉,更适
用于制药工业质量控制的常规分析。
2.4  化学荧光法
化学荧光法是基于化学方法使 TA 发光的简单、快速、
定量的分析方法。2007 年,Duangrat 等[5]将 NDA 结合氰基
化合物(-CN)与 TA 生成 CBI 衍生物(其入射和发射波长分
别为 420 nm 和 480 nm) , 该反应条件温和, 反应时间迅速 (<
5 min) ,而产物稳定时间超过 30 min,用于对产物的分析;
同时,测试结果显示反应的回收率在 98%-101.8%之间,检测
范围介于 8.4-84.0 pg/mL,而 RSD<1.85%。该方法被证实
用于水凝胶贴剂中 TA 释放及药物含量的研究。
2.5  毛细管电泳法
毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis,CE)是样
品中各组分以高压电场为驱动力,在毛细管中按其淌度和分
配系数不同进行高效快速分离分析的一种新技术。 Lin 等[6]
选择氧氟沙星酰氯(Ofloxacin Acyl Chloride,OAC)作为 TA
的生色基团,衍生产物具有额外的离子化基团——叔氨基
(产物在室温下稳定) ,在电场作用下可使其电泳。实验对
象为添加高剂量 TA 的手术患者血浆,测试结果显示,日内
及日间的精密度和准确度分别小于 5.8%和 4.8%。该方法相
比于 HPLC,过程更加简单快速。
A 3 TA  的药理活性
3.1  抗纤溶酶的止血原理
由于血液循环中存在各种纤溶酶(原) 的天然拮抗物,
如抗纤溶酶等,因此在正常情况下,血液中的抗纤溶活性比
纤溶活性高很多倍,而不会发生纤溶性出血。但这些拮抗物
不能阻滞已吸附在纤维蛋白网上的激活物(如尿激酶等)所
激活而形成的纤溶酶。纤溶酶是一种肽链内切酶,低剂量时
在中性环境中能裂解纤维蛋白(原)的精氨酸和赖氨酸肽链,
形成纤维蛋白降解产物,引起凝血块溶解而出血。纤溶酶原通过其分子结构中的赖氨酸结合部位而特异地吸附在纤维
蛋白上,赖氨酸则可以竞争性阻抑这种吸附作用,减少纤溶
酶原的吸附率,从而减少纤溶酶的激活程度,减少出血。
A 3.2 TA  的止血特性
TA 的化学结构与赖氨酸相似,也有止血效应。在高剂量
时尚能直接抑制纤溶酶活力,减少纤溶酶激活补体(C1)的作
用,从而防止遗传性血管神经性水肿的发生,其作用较氨基
己酸强。另外与氨基己酸(氨己酸)相比,TA 在组织中有更强
及更持久的抗纤溶酶活性,故其止血作用要强 6~10 倍。
4  展望
近年来,TA 临床应用范围的不断扩大,包括普通片及
胶囊、缓释片、糖浆剂、注射剂等,因此其检测方法也需不
断提高,以提高药物使用的安全性、合理性,同时为促进新
药研发提供科学依据。
参考文献
[1]Ghada M. H., et al. Optimization and Validation of
an HPLC-UV Method for Determination of Tranexamic Acid
in a Dosage Form and in Human Urine [J]. Chromatographia,
2007, 66(5-6): 311-317.
[2]Huertas-Pérez J. F., et al. Simple, rapid, and
sensitive liquid chromatography-fluorescence method
for the quantification of tranexamic acid in blood [J].
Journal of Chromatography A, 2007, 1157(1-2): 142-150.
[3]Bojko B., et al. Determination of tranexamic acid
concentration by solid phase microextraction and
liquid chromatography-tandem mass spectrometry: First
step to in vivo analysis [J]. J. Chromatogr. B, 2011,
879: 3781-3787.
[4]Tampubolon H. B., Sumarlik E. Densitometric Deter
mination of Tranexamic Acid in Tablets: Validation of
the Method[J].Journal of Liquid Chromatography &
Related Technologies, 2005, 28(20): 3243-3254.
[5]Duangrat, C., et al. Spectrofluorimetric Determina
tion of Tranexamic Acid in Hydrogel Patch Formulations
by  Derivatization  with  Naphthalene-2,3-dicarbox
aldehyde/cyanide. J. Cosmet. Sci., 2007, 58: 215-227
[6]Lin F. M., et al. An ionizable chromophoric reagent
for the analysis of primary amine-containing drugs by
capillary electrophoresis [J]. Electrophoresis, 2005,
26(3): 621-626.

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